Новая научная публикация в журнале Metabolites

Предлагаем Вам ознакомиться с новой научной публикацией на тему «Разработка и валидация методики определения диагностически значимых метаболитов α-аминокислот в сыворотке крови с использованием метода ВЭЖХ-МС/МС», авторами которой являются сотрудники аналитического центра Экзактэ Лабс — заведующий лабораторией биоаналитики Павел Соболев и химик-аналитик Бурнакова Наталья.

Профиль и динамические изменения концентрации метаболитов тирозина, фенилаланина и триптофана в крови представляют большой интерес для клинических исследований, поскольку их можно рассматривать как потенциальные биомаркеры различных заболеваний. Некоторые ароматические метаболиты, такие как 4‑гидроксифенилмолочная, 4-гидроксифенилуксусная, фенилмолочная и 4‑гидроксибензойная кислоты, ранее продемонстрировали свою диагностическую значимость у пациентов в критическом состоянии и у пациентов с постковидным синдромом.

В рамках проведённого исследования была разработана и валидирована методика определения шести фенил- и пяти индол-содержащих кислот в сыворотке крови с использованием метода ВЭЖХ-МС/МС. Для извлечения исследуемых соединений из сыворотки крови был использован метод осаждения белков метанолом. В качестве внутреннего стандарта (ВС) использовалась схожая с аналитами по хроматографическим и экстракционным показателям индол-3-уксусная кислота-d₄.

Хроматографическое разделение осуществляли на хроматографической колонке YMC Triart C18 (длина 50 мм, внутренний диаметр 2,0 мм, диаметр частиц сорбента 1,9 мкм) в режиме градиентного элюирования при скорости потока 0,4 мл/мин. В состав подвижной фазы входили вода и ацетонитрил с концентрацией модификатора уксусной кислоты 0,2%; общее время анализа 10 мин. Детектирование аналитов и ВС осуществляли в режиме ионизации электрораспылением с мониторингом множественных реакций (MRM) для положительно и отрицательно заряженных ионов.

Разработанная методика была валидирована согласно требованиям Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA), изучены все параметры, необходимые для подтверждения надёжности получаемых аналитических результатов: степень извлечения и матричный эффект, нижний предел количественного определения, диапазон определяемых содержаний, точность и прецизионность методики, селективность, эффект переноса пробы, стабильность соединений. Нижние пределы количественного определения аналитов варьируются от 0,02 мкМ до 0,25 мкМ. Степень извлечения всех аналитов и ВС достигает 100%, эффект матрицы незначителен.

Разработанная и валидированная методика была успешно применена для анализа образцов сыворотки крови здоровых добровольцев (n = 48) для выявления нормальных (референсных) значений целевых аналитов. Концентрации наиболее клинически значимого метаболита 4‑гидроксифенилмолочной кислоты, полученные с использованием методики ВЭЖХ^-МС/МС и разработанной ранее методики ГХ-МС, сопоставимы. В будущем методика ВЭЖХ-МС/МС может быть успешно использована в рутинной клинической практике медицинских центров.

Статья опубликована журнале Metabolites.

С полным текстом публикации Вы сможете ознакомиться по ссылке.

Павел Соболев представил доклад на эту тему в рамках Х Всероссийской конференции «Масс-спектрометрия и ее прикладные проблемы».

Также, рамках этой конференции Наталья Бурнакова представила свой доклад «Определение низкомолекулярных микробных и митохондриальных метаболитов в спинномозговой жидкости методом газовой хроматографии/масс-спектрометрии».